介紹EMSA的工作原理
更新時(shí)間:2022-03-28 點(diǎn)擊次數(shù):1062次
EMSA全稱是ElectrophoreticMobilityShiftAssay,中文叫凝膠遷移實(shí)驗(yàn)或電泳遷移率實(shí)驗(yàn),它是一種研究DNA與蛋白質(zhì)或RNA與蛋白質(zhì)相互作用的常用技術(shù),可用于定性和定量分析。
這項(xiàng)技術(shù)是基于DNA/蛋白質(zhì)或RNA/蛋白質(zhì)復(fù)合物在聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)中有不同遷移率的原理。首先讓蛋白質(zhì)與末端標(biāo)記的核酸探針結(jié)合,然后在跑PAGE膠,結(jié)合了蛋白質(zhì)的復(fù)合物比未結(jié)合蛋白質(zhì)的探針電泳的速度要慢,這樣,從PAGE膠的電泳結(jié)果就可以判斷,該蛋白是否和特定序列結(jié)合或者該序列是否和蛋白結(jié)合。
通過(guò)電泳遷移率的變化來(lái)進(jìn)行定性和定量分析,EMSA實(shí)驗(yàn)(凝膠/電泳遷移率實(shí)驗(yàn))基于素標(biāo)記探針與對(duì)應(yīng)的DNA結(jié)合蛋白的特異性結(jié)合,設(shè)計(jì)合理、科學(xué)的實(shí)驗(yàn)方案,為客戶提供驗(yàn)證性的EMSA,競(jìng)爭(zhēng)性的EMSA以及超遷移EMSA(Super-shiftEMSA)實(shí)驗(yàn)服務(wù)。
1、細(xì)胞核蛋白或純化的轉(zhuǎn)錄因子,部分實(shí)驗(yàn)亦可使用重組表達(dá)的蛋白,依據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)每張膜至少提供50ul,濃度大于0.5mg/ml。
2、探針序列,如無(wú)探針序列,請(qǐng)?zhí)峁〥NA結(jié)合蛋白相關(guān)信息或相關(guān)文獻(xiàn),便于技術(shù)人員設(shè)計(jì)探針。
3、結(jié)合蛋白特異性抗體50ul以上,濃度大于0.5mg/ml。