關(guān)于Tn5轉(zhuǎn)座酶的原理介紹
更新時(shí)間:2022-09-15 點(diǎn)擊次數(shù):1273次
RNA測(cè)序(RNA-Seq)是基于二代測(cè)序技術(shù)開(kāi)展轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究過(guò)程中廣泛使用的一種方法,能夠在特定時(shí)間點(diǎn)對(duì)生物樣本中的多種RNA進(jìn)行定性和定量分析。針對(duì)RNA測(cè)序的常規(guī)建庫(kù)方法都需要先將RNA轉(zhuǎn)換為雙鏈DNA,且需經(jīng)過(guò)目標(biāo)RNA富集及片段化、雙鏈DNA合成、接頭連接、PCR擴(kuò)增等多個(gè)步驟。
Tn5轉(zhuǎn)座酶復(fù)合體因能一步打斷雙鏈DNA并且使DNA兩端帶上接頭,而廣泛應(yīng)用于二代測(cè)序建庫(kù)等領(lǐng)域。近期也有研究發(fā)現(xiàn),Tn5轉(zhuǎn)座酶同樣能以類(lèi)似的方式作用于RNA/DNA雜合鏈,從而能夠省去傳統(tǒng)RNA建庫(kù)技術(shù)中的RNA片段化、二鏈合成等繁瑣的操作步驟,進(jìn)一步拓展了Tn5轉(zhuǎn)座酶的新用途。此外,Tn5轉(zhuǎn)座酶也被廣泛用于體外轉(zhuǎn)基因(外源基因整合到宿主細(xì)胞)等各領(lǐng)域。
執(zhí)行轉(zhuǎn)座功能的酶,通常由轉(zhuǎn)座子編碼,識(shí)別轉(zhuǎn)座子兩端的特異序列,能把轉(zhuǎn)座子從相鄰序列中脫離出來(lái),再插入到新的DNA靶位點(diǎn),無(wú)同源性要求。
EZ-Tn5™轉(zhuǎn)座酶具有較高的Tn5轉(zhuǎn)座活性。是高純度,單亞基的酶,可隨機(jī)插入EZ-Tn5至任何靶向DNA,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)插入DNA克隆的量為>106,當(dāng)用EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子在沒(méi)有鎂離子孵育時(shí),形成穩(wěn)定的EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子復(fù)合體,特定的認(rèn)識(shí)自然發(fā)生的Tn5和微小的Tn5轉(zhuǎn)座反應(yīng)和使EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子具有高活性的端端序列。