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DAP-SEQ體外蛋白表達載體構(gòu)建protocol

更新時間:2024-03-26   點擊次數(shù):3411次

在表觀遺傳學(xué)研究中,尋找轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控位點是困擾科學(xué)家的難題,經(jīng)典的ChIP-seq技術(shù)存在很多弊端,最主要的是抗體問題,對于非模式植物更難入手。與ChIP-seq相比,DAP-seq將蛋白質(zhì)體外表達技術(shù)與高通量測序技術(shù)相結(jié)合,不需要針對每個轉(zhuǎn)錄因子制備特異性抗體,所以DAP-seq具有快速、高通量、節(jié)約時間成本等顯著優(yōu)勢。

DAP-seq是研究非模式植物順反組和表觀組的有力技術(shù),大大擴展和加深了科學(xué)家們研究的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點信息。它能夠捕獲全部轉(zhuǎn)錄結(jié)合位點,因此能獲得完整的密碼本。并且,DAP-seq無需復(fù)雜和專門的實驗設(shè)備,這種方法可用于所有模式或非模式植物。這為我們提供了一扇窗口,來發(fā)現(xiàn)調(diào)控序列中表觀遺傳變異影響植物性狀的機制。

DAP-seq實驗流程:

構(gòu)建體外蛋白表達載體→體外蛋白表達→DNA文庫構(gòu)建→親和純化→上機測序

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